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技術(shù)專欄

通過兩種軟件計算ELISA結(jié)果
供稿:Technical division發(fā)布時間:2022-05-04瀏覽量:3927次

方法一:使用Curve  Expert1.4軟件(點擊下載Curve  Expert1.4

標準曲線的繪制 

可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標準曲線,下面以“Curve  Expert1.4”軟件為例,繪制ELISA標準曲線的方法如下;

1.啟動“Curve  Expert”

2.X軸輸入標準品的OD值(雙抗夾心輸入OD-空白值),Y軸輸入所對應的濃度值,如圖:

3.單擊[運行] 圖片 按鈕,出現(xiàn)如下對話框

4.單擊[ok]按鈕,出現(xiàn)如下兩個對話框,關(guān)閉下面一個對話框

5. 在對話框的右上角出現(xiàn)一些曲線的名稱,從“1”開始依次點擊曲線名稱,在右下角會出現(xiàn)相應擬合的曲線。

(一般選擇第一個多項式擬合)

 

 

 

6. 根據(jù)擬合的曲線選取ELISA擬合度最佳的曲線雙擊,出現(xiàn)如下對話框:

注意:選擇系數(shù)(即“r”值)最好的曲線方程來進行運算。在下面的對話框

右上角有“r”值 ,當“r”值越接近1擬合度越好

7.按[Ctrl]鍵+[L]鍵,出現(xiàn)如下對話框:

8.輸入標準的OD值,單擊[Calculate]按忸,即可得到待測蛋白的實際含量(標本稀釋了N倍,運算出的數(shù)值應在乘以N)。

 

9. 如想得到ELISA擬合曲線的方程,可在步驟6的對話框空白處右擊,選擇”Information”

10. 得到如下對話框:點擊“Copy”

 

在你需要的位置粘貼即可得到如下數(shù)據(jù):

Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)

Coefficient Data:

a =   -21.531017

b =  212.05019

c =  -0.24054479

d =  0.018060778

 

11. 修改作圖中X,Y坐標軸高度以及相關(guān)屬性

選擇步驟9所示圖中的第二排“Graph Properties”,修改好后點擊OK保存

 

方法二: 使用OriginPro 2021軟件計算競爭法試劑盒ELISA結(jié)果

第一步:我們以PG(Progesterone) ELISA Kit 這個試劑盒為例

 

 

將標曲的數(shù)據(jù)復制粘貼在如下表框中

按下Ctrl+A鍵全選然后鼠標依次單擊,Analysis---Fitting---Nonlinear Curve Fit---Open Dialog...

 

在Function Selection選項卡中,將 Category 參數(shù)設置為 Statistics

將Function參數(shù)設置為 Logistic

 

在Find X/Y選項卡中對 Find X from Y 進行勾選,然后單擊 Fit 鍵

橫縱坐標選擇Log10參數(shù),注意from / to 的上下限值的選擇,完成后單擊OK 鍵

 

最后結(jié)果計算,競爭法由于OD值與樣品濃度成反比關(guān)系,所以不需要減去零孔背景值,如果是夾心法的試劑盒,則還需要事先在excel中減去背景值然后再依據(jù)教程進行計算。

 

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