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品系背景∶C57BL/6N

品系構(gòu)建策略∶

在小鼠PD-1基因位點(diǎn)敲入人源PD-1胞外域序列，保留小鼠跨膜域和胞內(nèi)域，構(gòu)建嵌合型PD-1人源化小鼠模型。

品系說明∶

hPD-1在小鼠體內(nèi)具有正常的生理表達(dá)和調(diào)節(jié)模式。

PD-1胞外域人源化，利于hPD-1靶向藥物的識(shí)別。

保留小鼠PD-1胞內(nèi)域，保證正常的胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。

小鼠靶基因不表達(dá)，避免交叉反應(yīng)。

小鼠的免疫系統(tǒng)功能健全。

研究應(yīng)用∶

本模型可用于評(píng)估hPD-1靶向藥物在免疫健全小鼠體內(nèi)的有效性及安全性∶

與人源化腫瘤細(xì)胞系聯(lián)用

例如∶與MC38-hPD-L1腫瘤細(xì)胞系聯(lián)用，構(gòu)建同源腫瘤模型，以測試靶向hPD-1和hPD-L1 的聯(lián)合療法的療效。

與其他免疫檢查點(diǎn)人源化小鼠雜交

例如∶與hVISTA小鼠雜交，在得到的雙人源化的hPD-1/hVISTA小鼠模型中評(píng)估靶向hPD-1 和/或hVISTA的兩種藥物。

模型驗(yàn)證∶

PD-1表達(dá)檢測

圖1.hPD-1在hPD-1小鼠中的表達(dá)模式與mPD-1在野生型小鼠中的表達(dá)模式一致。

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hPD-1和mPD-1在經(jīng)αCD3/αCD28抗體活化的hPD-1小鼠和野生型小鼠脾細(xì)胞中的表達(dá)情況∶（A）Treg亞群、CD4+亞群（CD3+CD4+Foxp3-）和（B）CD8+T（CD3+CD8+）亞群。

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圖2. hPD-1在hPD-1小鼠的腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞中的表達(dá)。

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從接種了MC38腫瘤細(xì)胞30天的野生型小鼠和hPD-1小鼠中分離腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TILs）。hPD-1小鼠在CD4+ T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞上表達(dá)hPD-1蛋白，野生型小鼠在CD4* T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞上表達(dá)mPD-1蛋白。

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PD-1功能檢測

圖3.T細(xì)胞活化（IL-2的產(chǎn)生和擴(kuò)增）在野生型小鼠和PD-1人源化小鼠之間沒有差別。

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A.采用ELISA法測定野生型小鼠和PD-1人源化小鼠αCD3/αCD28活化脾細(xì)胞的上清液中IL-2 的產(chǎn)生情況，兩者沒有差別。

B.αCD3激活的脾細(xì)胞和淋巴結(jié)（LN）中的 CD4+T細(xì)胞亞群（CD4+ CD25-），CFSE標(biāo)記顯示在兩種小鼠之間的活化CD4+T細(xì)胞亞群的數(shù)量沒有明顯差別。

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體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)

圖4.人源化PD-1小鼠體內(nèi)觀察到hPD-1單抗的抗腫瘤活性。

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A）hPD-1小鼠接種MC38小鼠結(jié)直腸癌細(xì)胞28天后，分別用A、B、C三種αhPD-1單抗以及同型對(duì)照處理后的腫瘤體積。

B)? 野生型和hPD-1小鼠顱內(nèi)接種GL261小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞后，用αhPD-1抗體或amPD-1抗體處理。αhPD-1抗體處理能夠顯著提高h(yuǎn)PD-1小鼠的生存率。